헤르페스 진단

헤르페스 진단은 민감한 세포 배양을 통한 고전적인 바이러스 분리, 면역 형광 및 혈청학적 방법, 조직검사법, 그리고 현대 분자생물학적 방법(PCR, 도트 하이브리다이제이션)의 사용을 기반으로 하며, 이를 통해 HHV-6 및 HHV-7 유형을 포함한 전체 헤르페스 바이러스 그룹을 진단할 수 있습니다.

헤르페스 감염에 대한 실험실 진단 방법

HSV를 분리하거나 바이러스 입자 및/또는 그 구성 요소를 검출하는 것을 목표로 하는 주요 방법	인체의 생물학적 체액에서 HSV에 대한 항체를 검출하기 위한 보조 방법
민감한 세포 및 동물 배양에서 HSV 분리 직접 및 면역 전자 현미경 IPA의 직접 및 간접 변형 IFA 분자생물학적 방법 라텍스 응집 반응	중화 반응 RSC HSV-1,2의 비구조 단백질에 대한 항체 결정

환자의 76%에서 생식기 헤르페스(GH)가 HSV-2에 의해, 24%에서는 HSV-1에 의해 발생하는 것으로 나타났습니다. 또한, GH가 단일 감염으로 발생한 경우는 환자의 22%에 불과했으며, 78%의 사례에서 미생물 감염이 확인되었습니다. 46%의 환자에서 두 가지 병원균에 의한 기생충 감염이 확인되었으며, 이 중 40%에서 클라미디아가 검출되었습니다. 가드넬라균, 트리코모나스균, 임균은 도말 검사에서 검출 빈도가 낮았습니다.

환자의 27%에서 기생충 감염은 세 가지 병원균에 의해 나타났고, 5.2%에서는 네 가지 병원균에 의해 나타났습니다. 또한, 클라미디아와 가드넬라균, 칸디다균의 조합이 가장 흔하게 관찰되었습니다. 이러한 결과는 성장호르몬(GH) 환자에 대한 철저한 세균학적 검사를 통해 병원균의 조합을 확인하고, 비뇨생식기 혼합 감염의 병인에 대한 심층적인 연구가 필요함을 시사하며, 이를 통해 헤르페스 감염에 대한 차별화된 복합 치료를 가능하게 할 것입니다.

헤르페스 병변의 국소화에 따른 HSV 분리를 위해 연구된 재료

병변의 국소화	소포 내용물	세포 스크래핑				뇌척수액	기관지 흡인물	생검	피
		1	2	3	4
가죽	+								+
눈			+						+
외음부				+					+
항문	+				+				+
입	+	+							+
중추신경계	+					+		+	+
폐		+					+		+
간								+	+
선천성 헤르페스	+	+	+				+		+

거대세포바이러스 감염의 실험실 진단 방법

행동 양식	결과를 얻는 데 필요한 시간	노트
바이러스학
전자현미경	3시간	접근성이 좋지 않음
세포 배양에서의 바이러스 분리(VCI)	4~20일	표준, 느림
단일클론 항체를 사용한 초기 AG의 면역형광 염색	6시간	덜 구체적
세포학적	2~3시간	덜 구체적
혈청학적
RSC	2일	기준
알가(RGA)	1일	노동 집약적
암초	6시간	간단하고 구체적이다
NRIF	6시간	어려운
림프	6시간	어려운
ELISA(IgM, DO)	6시간	빠르고 간단함
면역블롯	6시간	값비싼
분자생물학
엠지	5~7일	비용이 많이 들고 노동 집약적
PCR	3시간	값비싼

대상포진 바이러스 진단 방법

진단 방법	실험실 기술
간접
선택	조직 배양, 닭 배아, 실험 동물, 허용 세포 또는 헬퍼 바이러스와의 공동 배양
분리균 식별	중화 반응, RSC, IF, PIEF, 분리균 침전 반응, 응집, IF
직접
세포학	도말 검사: 컬러 면역 형광 검사
조직학	세포의 병태생리학
구조	배아현미경, 면역전자현미경
항원의 결정	IF, PIEF, RIM, IFA
국소 항체 생성의 결정	Ig M, Ig G, Ig A: ELISA, RIA
분자생물학적 접근 방식	분자적 교잡, PCR

대상포진 바이러스 감염의 실험실 진단

진단 문제	행동 양식	예상 결과
급성 일차 감염	1	2시간 내 감지
	2	항체 수치가 천천히 상승하고 있습니다
	3	감염 후 3일째부터 존재
급성 재활성 감염	1	2시간 후 UUU 검출
	2	항체 수치가 천천히 상승하고 있습니다
	4	발진이 나타난 후 4일이 지나서야 나타납니다.

1. 액체 내 VEGF 소포의 결정
2. 혈청학: CSC, ELISA, 검출 목적
3. 혈청학: IgM을 검출하는 것을 목표로 하는 ELISA;
4. 혈청학: IgA, IgM을 검출하는 것을 목표로 한 ELISA.

대상포진 바이러스 감염에 대한 면역 반응을 나타내는 방법

접근하다	방법
2차 혈청에서 항체가 증가 검출	RSK, RTGA, RPGA, IF 중화반응, RIM, ELISA
첫 번째 혈청 샘플에서 IgG, Ig A 클래스 특이 항체 검출	ELISA, IF, RIM, 라텍스 응집

헤르페스바이러스 감염에 대한 환자 혈청의 혈청학적 검사 결과 해석(ELISA)

감염/마커 이름	감염에 대한 평균 임계값
	분석 결과	해석
거대세포항체 항-CMV IgG(1-20 U/ml) 항-CMV IgM(100-300%)	긍정적 1-6 긍정적 6-10 긍정적 >10 부정적 긍정적 100-300 부정적 <90 의심스러움 90-100	완화 질병 악화 질병의 급성기 감염(질병) 없음 질병의 급성기 2-3주 후에 분석 반복
단순포진 1,2 혈청형 항HSV 1/2 총 (100-900%)	양성 100-400 양성 400-800 양성 >800 음성 <100	완화 질병 악화 질병의 급성기 감염(질병) 없음

이 표는 헤르페스 바이러스 감염의 실험실 진단의 주요 방법과 헤르페스 병변의 국소화를 고려하여 HSV를 분리할 때 검사하는 권장 생물학적 물질을 제시합니다.

민감 세포 배양을 통한 헤르페스 단순포진 바이러스와 CMV 바이러스의 신뢰성 있는 분리. 재발 기간 동안 26명의 환자를 대상으로 바이러스 검사를 시행한 결과, 23건(88.4%)에서 민감 베로 세포 배양을 통해 HSV가 분리되었습니다. 감염된 배양액은 HSV에서 전형적으로 나타나는 세포 변성 작용, 즉 다핵 거대 세포 형성 또는 둥글고 커진 세포들이 덩어리 형태로 축적되는 양상을 보였습니다. 52.1%의 사례에서 바이러스의 세포 변성 작용 부위는 감염 후 16~24시간 이내에 이미 검출되었습니다. 감염된 배양액 배양 후 48~72시간까지 특이적인 세포 파괴를 유발하는 물질의 비율은 87%로 증가했습니다. 감염 후 96시간 이상 또는 반복 배양 중에 양성 결과가 검출된 사례는 13%에 불과했습니다.

전신성 헤르페스 감염의 실험실 진단 방법

헤르페스 바이러스, 그 입자 및 그 구성 요소를 검출(분리)하는 데 목적이 있는 주요 방법	생물학적 유체에서 헤르페스 바이러스에 대한 항체를 검출하고 혈청의 효소 변화를 검출하는 것을 목표로 하는 보조 방법
민감한 세포 및 동물 배양에서 헤르페스 바이러스 분리 직접 및 면역 전자 현미경 면역 과산화 효소 방법의 직접 및 간접 변형 형광 항체 방법의 직접 및 간접 변형 고체상 효소 면역 검정법의 변형 분자 (DNA-DNA) 하이브리다이제이션 방법의 변형 중합효소 연쇄 반응 라텍스 응집 반응	중화 시험 보체 고정 시험 라텍스 응집 시험 형광 항체법의 간접 버전 면역 과산화효소법의 간접 버전 고체상 효소 면역 측정법 의 변형 면역 블로팅법 방사형 보체 고정법 알라닌 및 아스파르트산 아미노전이효소 수준 결정

혈청학적 방법은 전염성 단핵구증(EBV 감염)을 진단하는 데 사용됩니다. 숫양 적혈구에서 폴-버넬 반응, 단일 혈청 검사에서 진단 역가 1:28 이상, 또는 혈청 쌍 검사에서 항체가 4배 증가한 경우를 들 수 있습니다. 4% 포르말린화 말 적혈구 현탁액을 이용한 호프-바우어 반응도 사용됩니다. 결과는 2분 후에 고려되며, 전염성 단핵구증에서 이 반응은 매우 특이적입니다.

현재 전염성 단핵구증 진단을 위한 효소면역측정법(EIA)이 개발되고 있습니다. 이 경우, 환자 혈청 내 IgG 및 IgM 항체는 EBV에 감염된 림프모세포와 배양한 후 형광 항체로 처리하여 측정합니다. 질병의 급성기에는 바이러스 캡시드 항원에 대한 항체가 1:160 이상의 역가로 측정됩니다.

여러 수입 상용 검사 시스템을 사용할 경우, ELISA는 다음을 검출할 수 있습니다. EBV 외피 항체, EBV 초기 항원 항체, 질병의 급성기에 핵과 세포질 모두에서 검출된 EBV 초기 항원 총 항체, 질병의 급성기에 핵과 세포질 모두에서 검출된 제한적 초기 EBV 항체, 질병의 최고조기에 세포질에서만 검출된 EBV 초기 항원에 대한 제한적 항체, 그리고 EBV 핵 항원 항체. 이러한 검사 시스템을 사용하면 EBV와 관련된 여러 질병의 감별 진단이 가능합니다.

EBV에 대한 항체가 확인된 양성 ELISA 검사 후, 확인 면역 블로팅 반응을 실시하여 개별 EBV 마커 단백질(p-단백질)에 대한 항체 존재 여부를 확인합니다. p23, p54, p72(이 단백질이 존재하면 EBV 번식 가능성이 있음을 나타냄), p 138. 위의 실험실 방법은 치료 효과를 모니터링하는 데에도 사용됩니다.

바이러스학적 방법의 민감도는 85~100%, 특이도는 100%이며, 검사 시간은 2~5일입니다. HSV-1 및 HSV-2에 대한 다클론 또는 단클론 항체를 이용한 직접 면역 형광법(DIF)은 실제 임상에서 자주 사용됩니다. DIF법은 일반 임상 검사실에서 재현성이 높고 비용이 저렴하며, 민감도는 80% 이상, 특이도는 90~95%입니다. 면역 형광 현미경 검사 결과, 요도, 자궁경부, 자궁경부, 직장 도말 검체에서 세포질 봉입체의 존재, 형태학적 특징, 감염 세포의 비율이 확인되었습니다.

PIF 방법은 세포의 형태학적 특성과 HSV 항원의 국소화 변화에 대한 아이디어를 제공합니다. 헤르페스 바이러스에 의한 세포 손상의 직접적인 징후(특정 발광 검출) 외에도, PIF 데이터에 따르면 헤르페스 감염의 간접적인 징후가 있습니다.

• 핵물질의 응집, 핵막의 분리
• 세포핵에서 단 하나의 핵막만 남아 있는 소위 "홀" 핵의 존재
• 핵내 포함물의 존재 - 카우드리 소체.

PIF를 시행할 때, 의사는 감염된 세포의 상태에 대한 정성적 평가뿐만 아니라 정량적 평가도 받게 되며, 이를 이용하여 아시클로비르(AC)를 이용한 항바이러스 치료의 효과를 평가했습니다. 따라서 단순 생식기 헤르페스(GH) 환자 80명을 역학적 PIF 방법을 사용하여 검사했습니다. 아시클로비르 치료 전 환자의 88%가 도말 검사에서 높은 비율의 감염 세포(50-75% 이상)를 보였지만, 아시클로비르를 한 차례 투여한 후 환자의 44%에서 도말 검사에서 건강한 세포가 검출되었고, 31%의 경우 단일 감염 세포가 관찰되었으며, 환자의 25%에서는 최대 10%의 감염 세포가 검출되었습니다.

아시클로비르로 치료한 생식기 헤르페스 환자의 도말(PIF 반응)에서 감염된 세포의 함량

질병 기간	얼룩의 함량 백분율
	감염된 세포					정상 세포
	75% 이상	50-75%	40~50%	10%	시야 내의 단일 셀
재발(치료 전)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
완화(치료 후)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

수년간 PIF(Physical Injury Factor)와 도트 하이브리다이제이션(dot hybridization) 방법을 사용해 온 결과, 연구 결과가 거의 100% 일치하는 것으로 나타났습니다. 특히 무증상 및 저발현 헤르페스 환자의 경우, 헤르페스 진단의 신뢰도를 높이기 위해 2~3가지 검사실 진단법을 함께 사용하는 것이 권장되며, 특히 임산부, 산부인과 병력이 있는 여성, 그리고 부인과적 진단을 받은 환자를 검사할 때 더욱 그렇습니다.

따라서 비뇨생식기 바이러스 및 세균 감염의 PCR 진단에서는 병력, 질병의 특정 임상 증상의 유무를 고려하여 양성 결과를 평가해야 합니다. PCR을 통해 클라미디아가 검출된 경우, 감염 가능성이 높으므로 치료 문제를 적절히 해결할 수 있습니다. 기회주의적 미생물인 마이코플라스마(유레아플라스마)가 검출된 경우, 진단을 확정하기 위해 추가적인 배양 검사, 즉 환자의 세포를 민감한 세포 배양액에 파종하는 것이 필요합니다. 배양 분석에서 양성 결과가 나온 경우에만 마이코플라스마증 진단의 실험실적 확진을 논의할 수 있습니다. 필요한 경우 동일한 방법을 통해 분리된 마이코플라스마의 자주 사용되는 제형(항생제, 플루오로퀴놀론 등)에 대한 감수성을 확인할 수 있습니다.

헤르페스바이러스과(Herpesviridae)의 여러 바이러스에 동시에 감염될 수 있습니다. 한 환자에서 HSV-1, HSV-2, CMV 바이러스 감염이 종종 검출되었습니다. 임상적 및 검사실 소견상 이차성 헤르페스 바이러스(종양혈액학적, 종양학적, HIV 감염 환자)가 있는 환자는 여러 헤르페스 바이러스에 감염될 가능성이 유의미하게 더 높았습니다. 따라서 HIV 감염으로 진행되는 임상적 및 면역학적 질환은 분자적 혼성화법을 통해 검출되는 헤르페스 바이러스 수의 증가를 동반하는 것으로 나타났습니다. 이 경우, 예후적으로 가장 중요한 것은 HSV-1, CMV, HHV-6 유형 DNA의 복합적인 동시 검출이라고 할 수 있습니다.

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